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產品簡介
MTS細胞增殖與細胞毒性檢測試劑盒的相關產品：DAPI溶液(5mg/ml)DAPI染色液Hoechst 33258細胞藍色熒光染料Hoechst 33258染色液Hoechst 33342細胞藍色熒光染料Hoechst 33342染色液活細胞染色液(Hoechst 33342)(100×)細胞活力檢測試劑盒(化學發光法)碘化丙啶Annexin V-FITC/PI細胞凋亡檢測試劑盒
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中文名稱：MTS細胞增殖與細胞毒性檢測試劑盒
英文名稱：MTS Cell Proliferation And Cytotoxicity Detection Kit
產品規格：500次
產品貨號：LZ-01X6321
發貨周期：1～3天
商品介紹：
| MTS是一種新型甲臜化合物，和MTT同屬四唑氮衍生物。MTS能被活細胞里的線粒體脫氫酶降解而產生棕黃色水溶性的甲臜，通過測定甲臜的光譜吸收，進而可以測定細胞的增殖情況。 產品特點： 1．本試劑盒是單溶液式細胞增殖與細胞毒性檢測試劑，主要成分包含MTS和一個電子耦合試劑，溶液的穩定性強，反應的靈敏度高。 2．操作簡便、快捷。可直接加入到檢測平板。在96-孔板中檢測時，無需洗滌或收獲細胞，免去溶解步驟。 3．無放射性。不需要配制液閃混合物，也不需要處理廢棄物。 4．與MTT相比，使用更安全。不需要使用揮發性的有機溶劑來溶解甲臜產物。 5．操作靈活，與MTT不同，平板讀數后可放回溫箱繼續孵育，使顏色進一步生成。 儲存條件：低溫運輸，-20℃避光保存，有效期半年。 使用效果： 96孔板中加入細胞100μL/孔(約1×104)，37℃，5% CO2細胞培養箱培養24小時，加入適當濃度的受試化合物。培養箱中孵育適當時間，每孔中加入10μL的MTS細胞增殖及毒性檢測溶液。37℃孵育1-4小時。490nm波長檢測光密度。 |
實驗報告：
一、分離與培養：
1、無菌條件下，取出1-3d 齡SD大鼠心房組織，然后用PBS將此組織塊清洗2次，最后將組織剪成1mm3左右大小；
2、往組織塊中加入4 mL酶消化液（0.1% 和0.1% I型膠原酶），混懸10s，置37℃條件下消化10min，之后用滴管吹打制成單細胞懸液，自然沉淀并收集上清，用含10% FBS培養基終止消化后4℃放置；
3、剩下的組織再加入3～4mL酶消化液，混懸10s，置37℃消化10 min后，按上述方法收集上清并終止消化后4℃放置，重復此步驟2-3次，直至組織*被消化；
4、用200目不銹鋼篩網過濾細胞消化液，1200r/min 離心10min，棄去上清，沉淀細胞用含有10％ FBS DMEM/F12培養基混懸，接種于25cm2培養瓶，放置于37℃ ，5％CO2 培養箱中培養；
5、差速貼壁1h后，吸出培養基，按實驗需要接種于6孔板中繼續培養；
二、免疫熒光鑒定：
1、待心房肌細胞生長至80%融合時，棄去培養基，用溫育的PBS沖洗細胞2次，每次10min，然后用4%多聚甲醛在室溫條件下固定細胞15min；
2、PBS沖洗細胞2次，每次10min，然后在4℃條件下，用0.1％Triton X-100透膜15min；
3、PBS沖洗細胞2次，每次10min，然后在室溫條件下，用4% BSA封閉細胞30min；
4、按1: 100的比例稀釋α-actin一抗，然后將其放在4℃冰箱中孵育細胞過夜；
5、PBS沖洗細胞3次，每次10min，按1：150的比例稀釋抗α-actin的二抗， 37℃條件下放置1h；
6、用PBS沖洗3次，每次10min，最后在倒置熒光顯微鏡下觀察圖像并拍照。
培養操作步驟：
1．用蓋片鑷將蓋玻片自75%乙醇中取出，用無菌絲綢布擦拭干凈，不要用紗布；
2．將蓋玻片輕輕放入6孔培養板（每孔一片）或培養皿中（每個平皿可放置2-3片）；
3．在距離紫外燈直射范圍內20-30 厘米處照射2-3小時；
4．將經過計數的細胞懸浮液移入培養板中，使蓋玻片*浸在培養液中；
5．將培養板在5% CO2水浴孵箱中37℃孵育2-3天，當貼壁細胞生長至覆蓋培養板底部2/3面積時，將培養板取出，用蓋片鑷輕輕取出蓋玻片，用蒸餾水漂洗后即可進行快速固定以及免疫細胞化學檢測。
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注意事項：
1、本試劑盒僅供科學研究使用，不可用于診斷或治療。
2、螺旋蓋微量試劑管裝的試劑在開蓋前請短暫離心，將蓋和管內壁上的液體離心至管底，避免開蓋時試劑損失。
3、禁止與其他品牌的試劑混用，否則會影響使用效果。
4、樣品或試劑被細菌或真菌污染或試劑交叉污染可能會導致錯誤的結果。
5、最好使用一次性吸頭、管、瓶或玻璃器皿，可重復使用的玻璃器皿必須在使用前清洗并*清除殘留清潔劑。
6、避免皮膚或粘膜與試劑接觸。
7、需長時間保存可-20℃避光保存。避免反復凍融，否則將會增加空白吸收，從而影響檢測結果。最好小劑量分裝，用避光袋或是黑紙、錫箔紙包住避光。
8、用培養基或 PBS 來配制待檢測藥物。如果待測藥物有還原性，則測定不含細胞，僅含有 MTS 的待測藥物溶液在 490 nm處的空白吸光度。如果該吸光度很小，則可以直接加入 MTS ，如果吸光度相對較大，則需要除去培養基，并用新鮮培養基洗滌細胞兩次，然后加入新的 100 μl 培養基和 10 μl MTS 進行檢測。
9、細胞處理需要小心操作,盡量避免人為的損傷細胞。
10、加 MTS 溶液后孵育時間的長短根據細胞的類型和細胞的密度等實驗情況而定，對于大多數情況孵育 1 小時即可，白細胞需要培養較長時間。
11、如果不是使用 96 孔板檢測，MTS 溶液的用量相應等比例增加即可。
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