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注意事項：1．基礎程序；2．擴增溫度和延伸溫度；3．反應時間；4．循環次數；5．PCR 反應液的配制；6．PCR技術的基本原理；7．PCR的反應動力學；8．PCR擴增產物；9．PCR反應體系與反應條件。
產品名稱 | 轉基因植物PAT基因核酸試劑盒規格 |
規格 | 48T |
貨號 | LZP8172 |
組成及試劑配制:
1、酶標板：一塊（96孔）
2、 標準品（凍干品）： 2瓶，請臨用前15分鐘內配制。每瓶以樣品稀釋液稀釋至0.5ml，蓋好后室溫靜置大約10分鐘，同時反復顛倒/搓動以助溶解，其濃度為200 U/L，然后做系列倍比稀釋（注：不要直接在板中進行倍比稀釋），分別配制成200 U/L，100 U/L，50 U/L，25 U/L，12.5 U/L，6.25 U/L，3.12 U/L，樣品稀釋液直接作為空白孔 0 U/L。如配制100 U/L標準品：取0.3ml （不要少于0.3ml ）200 U/L的上述標準品加入含有0.3ml樣品稀釋液的Eppendorf管中，混勻即可，其余濃度以此類推。
3、 樣品稀釋液：1×20ml。
4、 檢測稀釋液A：1×10ml。
5、 檢測稀釋液B：1×10ml。
實驗過程：
一、試劑準備
1. DNA模板
2．對應目的基因的特異引物（在PCR反應中，新合成的DNA是要接在一小段序列上才能繼續按照模板DNA復制，而不能從無到有，憑空合成。這一小段序列就是你所要有設計的引物。可以是DNA也可以是RNA，一般20多bp，需要根據你的模板鏈設計。因此，擴增不同的基因需要設計不同的引物）
3．10×PCR Buffer
4．2mM dNTPmix：含dATP、dCTP、dGTP、dTTP各2mM
5．Taq酶
二、操作步驟
1．在冰浴中，按以下次序將各成分加入一無菌0.5ml離心管中。
10×PCR buffer 5μl
dNTP mixl 4μl
引物1（10pM） 2μl
引物2（10PM） 2μl
Taq酶（2U/μl） 1μl
DNA模板（50ng-1μg/μl） 1 μl
加ddH2O至 50 μl
視PCR儀有無熱蓋，不加或添加石蠟油。
2．調整好反應程序。將上述混合液稍加離心，立即置PCR儀上，執行擴增。一般：在93℃預變性3-5min，進入循環擴增階段：93℃ 40s → 58℃ 30s → 72℃ 60s，循環30-35次，zui后在72℃ 保溫7min。
3．結束反應，PCR產物放置于4℃待電泳檢測或-20℃長期保存。
4．PCR的電泳檢測：如在反應管中加有石蠟油，需用100μlLuFang進行抽提反應混合液，以除去石蠟油；否則，直接取5-10μl電泳檢測。
三、注意事項
１．PCR反應應該在一個沒有DNA污染的干凈環境中進行設立一個的PCR實驗室。
２．純化模板所選用的方法對污染的風險有極大影響。一般而言，只要能夠得到可靠的結果，純化的方法越簡單越好。
３．所有試劑都應該沒有核酸和核酸酶的污染。操作過程中均應戴手套。
４．PCR試劑配制應使用zui高質量的新鮮雙蒸水，采用0.22μm濾膜過濾除菌或高壓滅菌。
５．試劑都應該以大體積配制，試驗一下是否滿意，然后分裝成僅夠一次使用的量儲存，從而確保實驗與實驗之間的連續性。
６．試劑或樣品準備過程中都要使用一次性滅菌的塑料瓶和管子，玻璃器皿應洗滌干凈并高壓滅菌。
７．PCR的樣品應在冰浴上化開，并且要充分混勻。
小鼠骨成型蛋白受體1A(mouse BMP-R1A)ELISA48T/96T進口分裝
小鼠骨成型蛋白受體Ⅱ(mouse BMP-R2)ELISA48T/96T進口分裝
小鼠腦鈉肽(mouse BNP)ELISA48T/96T進口分裝
小鼠N端前腦鈉素(mouse NT-proBNP)ELISA48T/96T進口分裝
小鼠骨唾液酸蛋白(mouse BSP)ELISA48T/96T進口分裝
小鼠CXCL3(mouse CXCL-3)ELISA48T/96T進口分裝
小鼠CXCR4(mouse CXCR-4)ELISA48T/96T進口分裝
小鼠皮質酮(mouse Corticosterone)ELISA48T/96T進口分裝
小鼠環氧化酶-2 (mouse COX-2)ELISA48T/96T進口分裝
小鼠結締組織生長因子(mouse CTGF)ELISA48T/96T進口分裝
小鼠細胞毒性T淋巴細胞相關抗原4 (mouse CTLA-4)ELISA48T/96T進口分裝
7－氨基去酰氧基頭孢烷酸（7-ADCA）（標準品）(R)-哌啶甲酸酯-L-鹽
β淀粉樣肽1-42(C端)/β-Amyloid 1-42 (CT)Fibulin 1/FITC 熒光素標記抗“衰老關鍵蛋白"IgG100 ul
β淀粉樣肽1-28/β-Amyloid 1-28Fibulin-5/FITC 熒光素標記抗“衰老關鍵蛋白"IgG100 ul
激活素受體2AFLG/FITC 熒光素標記絲聚蛋白/中間絲蛋白IgG20 ul
水通道蛋白5FLIP S/L /FITC 熒光素標記凋亡調節基因之一IgG100 ul
β淀粉樣肽（1-40）FLIPS/FITC 熒光素標記凋亡調節基因之一（短型）IgG100 ul
β淀粉樣肽（1-42）FN /FITC 熒光素標記纖維連結蛋白IgG100 ul
載脂蛋白A1FN/RBITC 紅色熒光素標記纖維連接蛋白IgG100 ul
β-抑制蛋白1FOS B/FITC 熒光素標記FosBIgG100 ul
轉基因植物PAT基因核酸試劑盒規格人活化素A(ACV-A)ELISA試劑盒英文名稱：Human Activin A，ACV-A ELISA Kit*
人肌鈣蛋白Ⅰ(Tn-Ⅰ)ELISA試劑盒英文名稱：Human Troponin Ⅰ，Tn-Ⅰ ELISA Kit*
人肌鈣蛋白T(Tn-T)ELISA試劑盒 英文名稱：Human Troponin T，Tn-T ELISA Kit進口/原裝
人肌紅蛋白(MYO/MB)ELISA試劑盒英文名稱：Human Myoglobin，MYO/MB ELISA Kit進口/分裝
人肌腱蛋白R(TN-R)ELISA試劑盒英文名稱：Human tenascin-R,TN-R ELISA Kit*
人肌球蛋白(MYS)ELISA試劑盒英文名稱：Human Myosin，MYS ELISA Kit進口/原裝小鼠分泌型免疫球蛋白A(sIgA)ELISA試劑盒 組裝/原裝
小鼠肺炎病毒（PVM）ELISA試劑盒 組裝/原裝
小鼠肺表面活性物質相關蛋白A(SP-A)ELISA試劑盒 組裝/原裝
小鼠泛素蛋白(Ub)ELISA試劑盒 組裝/原裝
檢測步驟：
一、 試劑的準備
從試劑盒中取出熒光PCR反應液(BC-qPCR MIX)、酶混合物(Enzymes MIX)，冰上融化并振蕩混勻后，10000rpm離心10s。
設所需要的PCR反應管管數為N(N=樣本數+1管陰性對照+1管陽性對照)，每個測試反應體系配制如下表：
試劑 每個反應加入的量 N個反應加入的量
熒光PCR反應液 14µL N×14µL
酶混合物 1 µL N×1 µL
總量 15 µL N×15µL
（1） 計算好各試劑的使用量，加入一適當體積潔凈離心管中，充分混勻，10000rpm離心10s，向設定的N個PCR反應管中分別加入15μL熒光PCR反應液，向每管中加入處理后樣品或陰性對照(NTC)和陽性對照(BC-PTC)5μL，10000rpm瞬時離心10秒。
7.2 qPCR反應條件
將各反應管放入定量PCR儀器的反應槽內。
推薦循環條件:
1循環 50℃ for 2 min
預變性 1循環 95℃ for 10 min
PCR擴增 40循環 95℃ for 15 sec
60℃ for 60 sec
在60℃延伸時收集熒光信號。報告基團：設置為FAM。淬滅基團：NONE，請勿選擇ROX參比熒光。
48T/96T
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