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產品簡介
藍舌病毒PCR檢測試劑盒說明書上海聯祖生物相關產品:活化蛋白激酶B100 ul白介素1α（IL-1α）ELISA試劑盒Jun D 活化蛋白激酶D100 ul白介素18結合蛋白（IL-18BP）ELISA試劑盒CK I alpha/STK
產品分類
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注意事項：1．基礎程序；2．擴增溫度和延伸溫度；3．反應時間；4．循環次數；5．PCR 反應液的配制；6．PCR技術的基本原理；7．PCR的反應動力學；8．PCR擴增產物；9．PCR反應體系與反應條件。
產品名稱 | 藍舌病毒PCR檢測試劑盒說明書 |
規格 | 50T |
貨號 | LZP7655 |
組成及試劑配制:
1、酶標板：一塊（96孔）
2、 標準品（凍干品）： 2瓶，請臨用前15分鐘內配制。每瓶以樣品稀釋液稀釋至0.5ml，蓋好后室溫靜置大約10分鐘，同時反復顛倒/搓動以助溶解，其濃度為200 U/L，然后做系列倍比稀釋（注：不要直接在板中進行倍比稀釋），分別配制成200 U/L，100 U/L，50 U/L，25 U/L，12.5 U/L，6.25 U/L，3.12 U/L，樣品稀釋液直接作為空白孔 0 U/L。如配制100 U/L標準品：取0.3ml （不要少于0.3ml ）200 U/L的上述標準品加入含有0.3ml樣品稀釋液的Eppendorf管中，混勻即可，其余濃度以此類推。
3、 樣品稀釋液：1×20ml。
4、 檢測稀釋液A：1×10ml。
5、 檢測稀釋液B：1×10ml。
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實驗過程：
一、試劑準備
1. DNA模板
2．對應目的基因的特異引物（在PCR反應中，新合成的DNA是要接在一小段序列上才能繼續按照模板DNA復制，而不能從無到有，憑空合成。這一小段序列就是你所要有設計的引物。可以是DNA也可以是RNA，一般20多bp，需要根據你的模板鏈設計。因此，擴增不同的基因需要設計不同的引物）
3．10×PCR Buffer
4．2mM dNTPmix：含dATP、dCTP、dGTP、dTTP各2mM
5．Taq酶
二、操作步驟
1．在冰浴中，按以下次序將各成分加入一無菌0.5ml離心管中。
10×PCR buffer 5μl
dNTP mixl 4μl
引物1（10pM） 2μl
引物2（10PM） 2μl
Taq酶（2U/μl） 1μl
DNA模板（50ng-1μg/μl） 1 μl
加ddH2O至 50 μl
視PCR儀有無熱蓋，不加或添加石蠟油。
2．調整好反應程序。將上述混合液稍加離心，立即置PCR儀上，執行擴增。一般：在93℃預變性3-5min，進入循環擴增階段：93℃ 40s → 58℃ 30s → 72℃ 60s，循環30-35次，zui后在72℃ 保溫7min。
3．結束反應，PCR產物放置于4℃待電泳檢測或-20℃長期保存。
4．PCR的電泳檢測：如在反應管中加有石蠟油，需用100μlLuFang進行抽提反應混合液，以除去石蠟油；否則，直接取5-10μl電泳檢測。
三、注意事項
１．PCR反應應該在一個沒有DNA污染的干凈環境中進行設立一個的PCR實驗室。
２．純化模板所選用的方法對污染的風險有極大影響。一般而言，只要能夠得到可靠的結果，純化的方法越簡單越好。
３．所有試劑都應該沒有核酸和核酸酶的污染。操作過程中均應戴手套。
４．PCR試劑配制應使用zui高質量的新鮮雙蒸水，采用0.22μm濾膜過濾除菌或高壓滅菌。
５．試劑都應該以大體積配制，試驗一下是否滿意，然后分裝成僅夠一次使用的量儲存，從而確保實驗與實驗之間的連續性。
６．試劑或樣品準備過程中都要使用一次性滅菌的塑料瓶和管子，玻璃器皿應洗滌干凈并高壓滅菌。
７．PCR的樣品應在冰浴上化開，并且要充分混勻。
高藜蘆酸(標準品)C37H42N2O6(S,S)-(+)-2,二甲氧基-1,雙(二甲氨基)丁烷
PD0325901C31H46O5碳酸肼
西他塞坦鈉/司他生坦鈉C9H12O32,2'-雙(2-)-4,4',5,5'-四基-1,2'-聯咪唑[光聚合引發劑]
西他塞坦鈉/司他生坦鈉C21H20NO6.Cl5'--羥基-2'-甲基-2-萘
西他塞坦鈉/司他生坦鈉C27H34O12呋喃酮酸酯
輪環藤寧四酸/1,4,7,10-四氮雜環十二烷-1,4,7,10-四酸C8H8O3(+)-二酰基-D-
拉米夫定C8H8O3磺酸酐
拉米夫定(標準品)C6H6O3Nα-[(9H-芴-9-氧基)羰基]-L-蘇氨酸叔丁酯
鹽酸三氟拉C11H10O4α-基肉桂酸酯
鹽酸三氟拉(標準品)C11H14O41--2,5-二氧基
皮質甾酮/腎上腺酮C30H30O8甲酰基-β-氨酸
皮質甾酮(標準品)C42H70O122,6-二并噻唑
二硫化四基秋蘭姆C10H8O33,5-二氟甲
雙硫侖(標準品)C7H8O2基化鎂
楊梅素/楊梅酮C11H10O3(R)-哌-2-羧酸
楊梅素/楊梅酮（標準品）C8H15NO2氨甲酰基-5-氟基酸
去氧膽酸C44H58O5酸鎘
β-環糊精C30H46O3氨基-2,5-二酚
白介素1受體相關激酶1(IRAK1)ELISA試劑盒phospho-c-Jun/AP-1(Thr91+Thr93) 酸化原癌基因c-Jun500 ul
白介素1受體拮抗劑(IL1Ra/CD121)ELISA試劑盒phospho-c-Jun (Ser73) 酸化原癌基因c-Jun1 Pack
白介素1可溶性受體Ⅱ(IL-1sRⅡ)ELISA試劑盒phospho-c-Jun (Ser243) 酸化原癌基因c-Jun300 ul
白介素1可溶性受體Ⅰ(IL-1sRⅠ)ELISA試劑盒phospho-c-Jun (Thr93) 酸化原癌基因c-Jun300 units
白介素1β前體(pro-IL1B)ELISA試劑盒phospho-c-Jun (Ser63) 酸化原癌基因c-Jun1 Kit
白介素1β(IL-1β)ELISA試劑盒Jun B 活化蛋白激酶B100 ul
白介素1α(IL-1α)ELISA試劑盒Jun D 活化蛋白激酶D100 ul
白介素18結合蛋白(IL-18BP)ELISA試劑盒CK I alpha/STK 屬絲/蘇氨酸蛋白質激酶100 ul
白介素18(IL-18)ELISA試劑盒CK II Alpha/STK 屬絲/蘇氨酸蛋白質激酶100 ul
藍舌病毒PCR檢測試劑盒說明書補體C4a+C4b蛋白抗體Ginseside F1中文名：人參皂苷F1別名：分子式：C36H62O9
少突膠質細胞跨膜蛋白抗體Ginseside F2中文名：人參皂苷F2別名：分子式：C42H72O13
6號染色體開放閱讀框140抗體Ginseside Rb2中文名：人參皂苷Rb2別名：分子式：C53H90O22
L型鈣通道蛋白抗體Ginseside CK中文名：人參皂苷CK別名：分子式：C36H62O8
電壓依賴性鈣通道Cav3.1抗體Lucidadiol中文名：別名：分子式：C30H48O3
檢測步驟：
一、 試劑的準備
從試劑盒中取出熒光PCR反應液(BC-qPCR MIX)、酶混合物(Enzymes MIX)，冰上融化并振蕩混勻后，10000rpm離心10s。
設所需要的PCR反應管管數為N(N=樣本數+1管陰性對照+1管陽性對照)，每個測試反應體系配制如下表：
試劑 每個反應加入的量 N個反應加入的量
熒光PCR反應液 14µL N×14µL
酶混合物 1 µL N×1 µL
總量 15 µL N×15µL
（1） 計算好各試劑的使用量，加入一適當體積潔凈離心管中，充分混勻，10000rpm離心10s，向設定的N個PCR反應管中分別加入15μL熒光PCR反應液，向每管中加入處理后樣品或陰性對照(NTC)和陽性對照(BC-PTC)5μL，10000rpm瞬時離心10秒。
7.2 qPCR反應條件
將各反應管放入定量PCR儀器的反應槽內。
推薦循環條件:
1循環 50℃ for 2 min
預變性 1循環 95℃ for 10 min
PCR擴增 40循環 95℃ for 15 sec
60℃ for 60 sec
在60℃延伸時收集熒光信號。報告基團：設置為FAM。淬滅基團：NONE，請勿選擇ROX參比熒光。
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