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產品簡介
多殺巴斯德菌PCR檢測試劑盒廠家上海聯祖生物相關產品:HK3檢測試劑盒公司產品僅用于科研實驗，不做其他用途！
產品分類
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注意事項：1．基礎程序；2．擴增溫度和延伸溫度；3．反應時間；4．循環次數；5．PCR 反應液的配制；6．PCR技術的基本原理；7．PCR的反應動力學；8．PCR擴增產物；9．PCR反應體系與反應條件。
產品名稱 | 多殺巴斯德菌PCR檢測試劑盒廠家 |
英文名稱 | Pasteurella multocidaPCR |
貨號 | LZP7114 |
實驗過程：
一、試劑準備
1. DNA模板
2．對應目的基因的特異引物（在PCR反應中，新合成的DNA是要接在一小段序列上才能繼續按照模板DNA復制，而不能從無到有，憑空合成。這一小段序列就是你所要有設計的引物。可以是DNA也可以是RNA，一般20多bp，需要根據你的模板鏈設計。因此，擴增不同的基因需要設計不同的引物）
3．10×PCR Buffer
4．2mM dNTPmix：含dATP、dCTP、dGTP、dTTP各2mM
5．Taq酶
二、操作步驟
1．在冰浴中，按以下次序將各成分加入一無菌0.5ml離心管中。
10×PCR buffer 5μl
dNTP mixl 4μl
引物1（10pM） 2μl
引物2（10PM） 2μl
Taq酶（2U/μl） 1μl
DNA模板（50ng-1μg/μl） 1 μl
加ddH2O至 50 μl
視PCR儀有無熱蓋，不加或添加石蠟油。
2．調整好反應程序。將上述混合液稍加離心，立即置PCR儀上，執行擴增。一般：在93℃預變性3-5min，進入循環擴增階段：93℃ 40s → 58℃ 30s → 72℃ 60s，循環30-35次，zui后在72℃ 保溫7min。
3．結束反應，PCR產物放置于4℃待電泳檢測或-20℃長期保存。
4．PCR的電泳檢測：如在反應管中加有石蠟油，需用100μlLuFang進行抽提反應混合液，以除去石蠟油；否則，直接取5-10μl電泳檢測。
三、注意事項
１．PCR反應應該在一個沒有DNA污染的干凈環境中進行設立一個的PCR實驗室。
２．純化模板所選用的方法對污染的風險有極大影響。一般而言，只要能夠得到可靠的結果，純化的方法越簡單越好。
３．所有試劑都應該沒有核酸和核酸酶的污染。操作過程中均應戴手套。
４．PCR試劑配制應使用zui高質量的新鮮雙蒸水，采用0.22μm濾膜過濾除菌或高壓滅菌。
５．試劑都應該以大體積配制，試驗一下是否滿意，然后分裝成僅夠一次使用的量儲存，從而確保實驗與實驗之間的連續性。
６．試劑或樣品準備過程中都要使用一次性滅菌的塑料瓶和管子，玻璃器皿應洗滌干凈并高壓滅菌。
７．PCR的樣品應在冰浴上化開，并且要充分混勻。檢測步驟：
一、 試劑的準備
從試劑盒中取出熒光PCR反應液(BC-qPCR MIX)、酶混合物(Enzymes MIX)，冰上融化并振蕩混勻后，10000rpm離心10s。
設所需要的PCR反應管管數為N(N=樣本數+1管陰性對照+1管陽性對照)，每個測試反應體系配制如下表：
試劑 每個反應加入的量 N個反應加入的量
熒光PCR反應液 14µL N×14µL
酶混合物 1 µL N×1 µL
總量 15 µL N×15µL
（1） 計算好各試劑的使用量，加入一適當體積潔凈離心管中，充分混勻，10000rpm離心10s，向設定的N個PCR反應管中分別加入15μL熒光PCR反應液，向每管中加入處理后樣品或陰性對照(NTC)和陽性對照(BC-PTC)5μL，10000rpm瞬時離心10秒。
7.2 qPCR反應條件
將各反應管放入定量PCR儀器的反應槽內。
推薦循環條件:
1循環 50℃ for 2 min
預變性 1循環 95℃ for 10 min
PCR擴增 40循環 95℃ for 15 sec
60℃ for 60 sec
在60℃延伸時收集熒光信號。報告基團：設置為FAM。淬滅基團：NONE，請勿選擇ROX參比熒光。
組成及試劑配制:
1、酶標板：一塊（96孔）
2、 標準品（凍干品）： 2瓶，請臨用前15分鐘內配制。每瓶以樣品稀釋液稀釋至0.5ml，蓋好后室溫靜置大約10分鐘，同時反復顛倒/搓動以助溶解，其濃度為200 U/L，然后做系列倍比稀釋（注：不要直接在板中進行倍比稀釋），分別配制成200 U/L，100 U/L，50 U/L，25 U/L，12.5 U/L，6.25 U/L，3.12 U/L，樣品稀釋液直接作為空白孔 0 U/L。如配制100 U/L標準品：取0.3ml （不要少于0.3ml ）200 U/L的上述標準品加入含有0.3ml樣品稀釋液的Eppendorf管中，混勻即可，其余濃度以此類推。
3、 樣品稀釋液：1×20ml。
4、 檢測稀釋液A：1×10ml。
5、 檢測稀釋液B：1×10ml。
Sodium lactate正丁酰氯 98%2,3-二氯-1,4-萘醌 98%
Sodium DL-lactate氯代異烷 CP,97%1-代萘 98%
Calcium citrate tetrahydrate氯代異烷 GR,99%1-硝基萘 CP,94%
Ferric citrate氯乙酰氯 98%1-硝基萘 99%
Sodium DL-ma1ate3-氯新戊酰氯 98%β-萘酚 AR
Sodium DL-ma1ate trihydrate氯代正烷 99%β-萘酚 熒光指示劑, ≥99.0% (GC
Zinc gluconate二氯乙酰氯 98%3,5-二氯-1-溴苯 98%
Calcium D-gluconate酸乙酯 97%酮縮甘油 98%
Ferric phosphate dihydrate酸乙酯 AR,99% 3,5-二氯苯異酸酯 97%
Iron(III) phosphate tetrahydrate異丁酰氯 98%N-甲基鄰苯二胺鹽酸鹽 99%
DL-lactic acid lithium s酸甲酯 AR,99.0%1,2,3,5-四氯苯 96%
Sodium citrate dihydrate*酯 99%1,2,3,5-四氯苯 分析標準品
Sodium D-gluconate三氯乙酰氯 98%1,3,5-三氯苯 99%
CNP-Afu特戊酰氯 98%1,3,5-三氯苯標準溶液 0.109mg/ml，基體: 異辛烷
Potassium sorbate正戊酰氯 98%1,2,4,5-四氯苯 98%
Calcium DL-malate AR,98%1,2,4,5-四氯苯標準溶液 0.104mg/ml，基體:異辛烷
艾地苯醌(標準品)IL-6 (D3K2N) Rabbit mAbRNF150 環指蛋白150抗體
伊潘立酮MAPKAPK-2 (D1E11) Rabbit mAbRNF15 環指蛋白15抗體
伊潘立酮(標準品)EML4 (D7Y8F) XP® Rabbit mAbRNF149 環指蛋白149抗體
亞胺培南Human EGF Neutralizing (D8A1) Rabbit mAbRNF148 環指蛋白148抗體
亞胺培南（標準品）Tri-Methyl-Histone H3 (Lys27) (C36B11) Rabbit mAb (Alexa Fluor® 647 Conjugate)RNF144 E3泛素蛋白連接酶144A抗體
吲達帕胺LLGL1 (D2B5A) Rabbit mAbRNF14 環指蛋白14抗體
吲達帕胺（標準品）Ki-67 (D3B5) Rabbit mAb (PE Conjugate)RNF14 環指蛋白14抗體
帕(標準品)IL-10 (D13A11) XP® Rabbit mAbRNF139 環指蛋白139抗體
帕p190-A RhoGAP (D8Q6C) Rabbit mAbRNF138 環指蛋白138抗體
鹽酸洛哌丁胺HSP60 (D6F1) XP® Rabbit mAbRNF133 環指蛋白133抗體
多殺巴斯德菌PCR檢測試劑盒廠家人抗腎小球基底膜抗體(GBM)ELISA試劑盒 *shēng huà shì jì 容量：RT800條/箱
人抗鼠抗體(HAMA)ELISA試劑盒 *shēng huà shì jì 容量：
人抗雙鏈DNA抗體/天然DNA抗體(dsDNA)ELISA試劑盒 *shēng huà shì jì 容量：25克
人抗髓磷脂抗體IgA(AMAIgA)ELISA試劑盒 *shēng huà shì jì 容量：RT支
人抗髓鞘相關糖蛋白抗體(MAGAb)ELISA試劑盒 *shēng huà shì jì 容量：100克
人抗糖蛋白抗體(GP)ELISA試劑盒 *shēng huà shì jì 容量：100克
人抗天然脫氧核糖核酸抗體(n-DNA-Ab)ELISA試劑盒 *shēng huà shì jì 容量：100克
人抗透明帶抗體(aZP)ELISA試劑盒 *shēng huà shì jì 容量：100毫克
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