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產品簡介
衣氏放線菌PCR檢測試劑盒說明書上海聯祖生物相關產品:ALDH檢測試劑盒用于分離和初步鑒別單增李斯特氏菌和其它李斯特菌李斯特氏菌顯色培養基
產品分類
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注意事項：1．基礎程序；2．擴增溫度和延伸溫度；3．反應時間；4．循環次數；5．PCR 反應液的配制；6．PCR技術的基本原理；7．PCR的反應動力學；8．PCR擴增產物；9．PCR反應體系與反應條件。
產品名稱 | 衣氏放線菌PCR檢測試劑盒說明書 |
英文名稱 | Actinomyces israeliiPCR |
貨號 | LZP6339 |
組成及試劑配制:
1、酶標板：一塊（96孔）
2、 標準品（凍干品）： 2瓶，請臨用前15分鐘內配制。每瓶以樣品稀釋液稀釋至0.5ml，蓋好后室溫靜置大約10分鐘，同時反復顛倒/搓動以助溶解，其濃度為200 U/L，然后做系列倍比稀釋（注：不要直接在板中進行倍比稀釋），分別配制成200 U/L，100 U/L，50 U/L，25 U/L，12.5 U/L，6.25 U/L，3.12 U/L，樣品稀釋液直接作為空白孔 0 U/L。如配制100 U/L標準品：取0.3ml （不要少于0.3ml ）200 U/L的上述標準品加入含有0.3ml樣品稀釋液的Eppendorf管中，混勻即可，其余濃度以此類推。
3、 樣品稀釋液：1×20ml。
4、 檢測稀釋液A：1×10ml。
5、 檢測稀釋液B：1×10ml。
實驗過程：
一、試劑準備
1. DNA模板
2．對應目的基因的特異引物（在PCR反應中，新合成的DNA是要接在一小段序列上才能繼續按照模板DNA復制，而不能從無到有，憑空合成。這一小段序列就是你所要有設計的引物。可以是DNA也可以是RNA，一般20多bp，需要根據你的模板鏈設計。因此，擴增不同的基因需要設計不同的引物）
3．10×PCR Buffer
4．2mM dNTPmix：含dATP、dCTP、dGTP、dTTP各2mM
5．Taq酶
二、操作步驟
1．在冰浴中，按以下次序將各成分加入一無菌0.5ml離心管中。
10×PCR buffer 5μl
dNTP mixl 4μl
引物1（10pM） 2μl
引物2（10PM） 2μl
Taq酶（2U/μl） 1μl
DNA模板（50ng-1μg/μl） 1 μl
加ddH2O至 50 μl
視PCR儀有無熱蓋，不加或添加石蠟油。
2．調整好反應程序。將上述混合液稍加離心，立即置PCR儀上，執行擴增。一般：在93℃預變性3-5min，進入循環擴增階段：93℃ 40s → 58℃ 30s → 72℃ 60s，循環30-35次，zui后在72℃ 保溫7min。
3．結束反應，PCR產物放置于4℃待電泳檢測或-20℃長期保存。
4．PCR的電泳檢測：如在反應管中加有石蠟油，需用100μlLuFang進行抽提反應混合液，以除去石蠟油；否則，直接取5-10μl電泳檢測。
三、注意事項
１．PCR反應應該在一個沒有DNA污染的干凈環境中進行設立一個的PCR實驗室。
２．純化模板所選用的方法對污染的風險有極大影響。一般而言，只要能夠得到可靠的結果，純化的方法越簡單越好。
３．所有試劑都應該沒有核酸和核酸酶的污染。操作過程中均應戴手套。
４．PCR試劑配制應使用zui高質量的新鮮雙蒸水，采用0.22μm濾膜過濾除菌或高壓滅菌。
５．試劑都應該以大體積配制，試驗一下是否滿意，然后分裝成僅夠一次使用的量儲存，從而確保實驗與實驗之間的連續性。
６．試劑或樣品準備過程中都要使用一次性滅菌的塑料瓶和管子，玻璃器皿應洗滌干凈并高壓滅菌。
７．PCR的樣品應在冰浴上化開，并且要充分混勻。
人肺炎衣原體抗體IgM（Cpn-IgM）elisa試劑盒Anti-ANGPT1 Antibody研究領域 腫瘤 細胞生物 免疫學 信號轉導 轉錄調節因子
人多功能蛋白聚糖（versican）elisa試劑盒Anti-ANGPT1 Antibody研究領域 腫瘤 細胞生物 免疫學 細胞凋亡 激酶和磷酸酶
人多巴胺-β羥化酶（DBH）elisa試劑盒Anti-ANGPT1 Antibody研究領域 腫瘤 細胞生物 免疫學 糖尿病 糖蛋白
人電子轉運黃素蛋白-泛醌氧化還原酶/電子轉運黃素蛋白脫氫酶elisa試劑盒Anti-ANGPT2 Antibody研究領域 心血管 細胞生物 免疫學
人低氧誘導因子1α（HIF-1α）elisa試劑盒Anti-ANGPT2 Antibody研究領域 腫瘤 信號轉導 腫瘤細胞生物標志物 線粒體
人蛋白酶體（prosome,macropain）亞基,β型,2（PSMB2）elisa試劑盒Anti-ANGPT2 Antibody研究領域 腫瘤 免疫學 染色質和核信號
人存活素抗體/生存蛋白（Surv）elisa試劑盒Anti-ANGPTL3 Antibody研究領域 腫瘤 腫瘤細胞生物標志物
人層粘連蛋白-5（LN-5）elisa試劑盒Anti-ANGPTL1 Antibody研究領域 腫瘤 信號轉導 生長因子和激素 腫瘤細胞生物標志物
人補體因子I（CFI）elisa試劑盒Anti-ANGPTL3 Antibody研究領域 腫瘤 細胞生物 免疫學 信號轉導 細胞骨架 腫瘤細胞生物標志物
人補體1q（C1q）elisa試劑盒Anti-ANGPTL8 Antibody研究領域 微生物學 細菌及
人胞質動力蛋白（CD）elisa試劑盒Anti-ANGPTL4 Antibody研究領域 細胞生物 免疫學 信號轉導 糖蛋白
人伴侶蛋白10（CPN10）elisa試劑盒Anti-ANLN Antibody研究領域 細胞生物 免疫學 信號轉導 轉錄調節因子 G蛋白偶聯受體
布氏肉湯添加劑2ml*5每支加入225ml布氏肉湯中
NA培養基 NA Medium 菌落總數測定
Pfizer腸球菌選擇性瓊脂(PSE瓊脂)250g/瓶糞鏈球菌選擇性分離incubationmediaPfizer腸球菌選擇性瓊脂(PSE瓊脂)250g/瓶糞鏈球菌選擇性分離
ListeriaEnrichmentBrothBase
乳糖-明膠培養基 Lactose-Gelatin Medium 250克 產氣莢膜梭菌明膠液化試驗
TSC瓊脂 TSC Agar 250克 產氣莢膜梭菌的平板計數
PY培養基 PY Medium 250克 產氣莢膜梭菌的培養
產芽孢肉湯 Sporulation Broth 250克 產氣莢膜梭菌的產芽孢培養
衣氏放線菌PCR檢測試劑盒說明書即刻早期基因ARC抗體2"-O-Glucosylrutin中文名：別名：Quercetin 3-O-β-D-glucopyrasyl(1→2)[α-L-rhampyrasyl(1→6)]-β-D-glucopyraside分子式：C33H40O21
ADP核糖基化因子6抗體Procyanidin B2 3''-O-gallate中文名：原花青素B2-3''-O-沒食子酸酯別名：Epicatechin-(4β→8)-epicatechin 3''-O-gallate分子式：C37H30O16
芳香化酶抗體Procyanidin B5中文名：原花青素B5別名：Procyanidin B-5; Epicatechin-(4β→6)-epicatechin分子式：C30H26O12
Artemin抗體2'',3''-Dihydroochnaflavone中文名：別名：分子式：C30H20O10
alpha 1腎上腺素能受體A抗體Procyanidin C1中文名：原花青素C1別名：分子式：C45H38O18
檢測步驟：
一、 試劑的準備
從試劑盒中取出熒光PCR反應液(BC-qPCR MIX)、酶混合物(Enzymes MIX)，冰上融化并振蕩混勻后，10000rpm離心10s。
設所需要的PCR反應管管數為N(N=樣本數+1管陰性對照+1管陽性對照)，每個測試反應體系配制如下表：
試劑 每個反應加入的量 N個反應加入的量
熒光PCR反應液 14µL N×14µL
酶混合物 1 µL N×1 µL
總量 15 µL N×15µL
（1） 計算好各試劑的使用量，加入一適當體積潔凈離心管中，充分混勻，10000rpm離心10s，向設定的N個PCR反應管中分別加入15μL熒光PCR反應液，向每管中加入處理后樣品或陰性對照(NTC)和陽性對照(BC-PTC)5μL，10000rpm瞬時離心10秒。
7.2 qPCR反應條件
將各反應管放入定量PCR儀器的反應槽內。
推薦循環條件:
1循環 50℃ for 2 min
預變性 1循環 95℃ for 10 min
PCR擴增 40循環 95℃ for 15 sec
60℃ for 60 sec
在60℃延伸時收集熒光信號。報告基團：設置為FAM。淬滅基團：NONE，請勿選擇ROX參比熒光。
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