在現(xiàn)代分子生物學(xué)研究中，PCR技術(shù)因其高效、靈敏的特點(diǎn)而被廣泛應(yīng)用于基因擴(kuò)增與檢測(cè)。隨著科研需求的日益增長(zhǎng)，市場(chǎng)上出現(xiàn)了多種即用型PCR試劑盒，這些產(chǎn)品不僅簡(jiǎn)化了實(shí)驗(yàn)流程，還提高了結(jié)果的穩(wěn)定性和重復(fù)性。本文將介紹常見(jiàn)的
即用型PCR試劑盒所采用的主要載體類型。
1.Taq DNA聚合酶
作為一代也是經(jīng)典的PCR用酶，Taq DNA聚合酶是從水生嗜熱菌中提取出來(lái)的一種耐熱蛋白質(zhì)。它能夠在較高溫度下保持活性而不變性，非常適合于需要反復(fù)加熱冷卻循環(huán)的PCR過(guò)程。基于Taq酶開(kāi)發(fā)的即用型PCR試劑盒適用于大多數(shù)常規(guī)目的的DNA段擴(kuò)增，如基因克隆、序列分析等。
2.Pfu DNA聚合酶
相較于Taq酶，Pfu DNA聚合酶具有更高的保真度，這意味著它在復(fù)制過(guò)程中引入錯(cuò)誤的概率更低。這對(duì)于要求高度準(zhǔn)確性的應(yīng)用場(chǎng)合尤為重要，比如定點(diǎn)突變構(gòu)建或者全長(zhǎng)基因合成。使用Pfu酶制備的即用型PCR試劑盒通常包含優(yōu)化后的緩沖體系以及dNTPs混合物，以進(jìn)一步提升擴(kuò)增效率及產(chǎn)物質(zhì)量。
3.KOD-Plus-DNA聚合酶
KOD-Plus-是一種來(lái)源于南極細(xì)菌的嗜熱DNA聚合酶，擁有高的熱穩(wěn)定性和強(qiáng)大的延伸能力。這使得它特別適合于大規(guī)模并行測(cè)序項(xiàng)目中的文庫(kù)制備工作。相應(yīng)地，專為此類應(yīng)用場(chǎng)景設(shè)計(jì)的即用型PCR試劑盒通常會(huì)提供預(yù)混好的Master Mix，方便用戶直接加入引物即可開(kāi)始實(shí)驗(yàn)。
4.Bst DNA聚合酶
雖然不是傳統(tǒng)意義上的“即用型”，但提到PCR相關(guān)載體時(shí)不得不提Bst DNA聚合酶。這是一種大段恒溫?cái)U(kuò)增技術(shù)中使用的關(guān)鍵成分之一，能夠在恒定溫度下完成長(zhǎng)達(dá)數(shù)千個(gè)堿基對(duì)的目標(biāo)序列擴(kuò)增。盡管操作條件特殊且成本相對(duì)較高，但對(duì)于某些特定研究仍然具有不可代替的價(jià)值。
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更新時(shí)間：2025-01-13
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