鮑氏不動桿菌（Acinetobacter baumannii）是一種重要的多重耐藥革蘭陰性條件致病菌，常引起醫(yī)院獲得性肺炎、血流感染及傷口感染，嚴(yán)重威脅重癥患者生命安全。為實(shí)現(xiàn)快速、精準(zhǔn)檢測，基于熒光定量pcr（qpcr）技術(shù)的熒光pcr檢測試劑盒已被廣泛應(yīng)用于臨床微生物實(shí)驗(yàn)室。值得注意的是，盡管pcr本身不依賴傳統(tǒng)培養(yǎng)，但在試劑盒開發(fā)、性能驗(yàn)證及陽性對照制備等環(huán)節(jié)，仍需依賴特定培養(yǎng)基對鮑氏不動桿菌進(jìn)行擴(kuò)增培養(yǎng)。本文將聚焦于該過程中所用培養(yǎng)基的關(guān)鍵組分及其典型含量，解析其在保障檢測準(zhǔn)確性中的作用。
一、基礎(chǔ)營養(yǎng)成分
常用的培養(yǎng)基為Mueller-Hinton Broth（MHB）或Luria-Bertani（LB）液體培養(yǎng)基。以LB為例，其標(biāo)準(zhǔn)配方通常包含：胰蛋白胨（Tryptone）10 g/L、酵母提取物（Yeast Extract）5 g/L、氯化鈉（NaCl）10 g/L，pH調(diào)至7.0–7.2。胰蛋白胨提供氨基酸與多肽，酵母提取物富含維生素與核苷酸，共同滿足鮑氏不動桿菌快速生長的代謝需求。高純度原料可避免抑制pcr反應(yīng)的雜質(zhì)（如多糖、酚類）混入后續(xù)DNA提取流程。
二、選擇性添加劑
在復(fù)雜樣本（如痰液、傷口拭子）中，為抑制雜菌生長、富集鮑氏不動桿菌，可在基礎(chǔ)培養(yǎng)基中添加選擇性抑制劑。如加入Ceftazidime（32 mg/L）或Imipenem（2–4 mg/L）可抑制多數(shù)腸桿菌科細(xì)菌，而鮑氏不動桿菌因天然耐藥性得以增殖。此外，部分研究采用含Vancomycin（30 mg/L）的培養(yǎng)基，以抑制革蘭陽性菌干擾。需注意：抗生素濃度過高可能抑制目標(biāo)菌，過低則選擇性不足，需經(jīng)預(yù)實(shí)驗(yàn)優(yōu)化。
三、緩沖與滲透壓調(diào)節(jié)劑
維持穩(wěn)定的pH和滲透壓對細(xì)菌活性至關(guān)重要。除NaCl外，部分改良培養(yǎng)基添加磷酸鹽緩沖體系（如K?HPO?2.3 g/L、KH?PO?1.5 g/L），使pH在培養(yǎng)過程中保持在6.8–7.4之間，避免代謝產(chǎn)酸導(dǎo)致環(huán)境惡化。此外，Mg²?和Ca²?（通常以MgSO?·7H?O 0.12 g/L、CaCl?0.011 g/L形式加入）雖非LB常規(guī)成分，但在某些高密度培養(yǎng)方案中用于穩(wěn)定細(xì)胞膜結(jié)構(gòu)，提升DNA得率。
四、與pcr兼容性的考量
用于制備陽性模板的培養(yǎng)基必須確保后續(xù)核酸提取的高效性。因此，應(yīng)避免使用含高濃度瓊脂、染料（如結(jié)晶紫）或螯合劑（如EDTA）的成分，以免干擾裂解或抑制Taq酶活性。理想情況下，培養(yǎng)16–18小時(shí)后，菌液OD???達(dá)0.6–0.8，此時(shí)菌體處于對數(shù)生長期，DNA完整性高，可作為標(biāo)準(zhǔn)陽性對照。
鮑氏不動桿菌熒光pcr檢測試劑盒配套培養(yǎng)基雖不直接參與擴(kuò)增反應(yīng)，但其組分設(shè)計(jì)直接影響陽性對照質(zhì)量與檢測可靠性。通過科學(xué)配比營養(yǎng)、選擇性抑制與緩沖體系，在保障目標(biāo)菌高效增殖的同時(shí)，最大限度減少pcr抑制物引入，是實(shí)現(xiàn)“快、準(zhǔn)、穩(wěn)”分子診斷的重要前提。未來，隨著無培養(yǎng)直接檢測技術(shù)的發(fā)展，此類培養(yǎng)基的應(yīng)用或?qū)⒅鸩綔p少，但在當(dāng)前質(zhì)量控制體系中仍十分重要。
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更新時(shí)間：2026-01-20
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